犬用凍精稀釋液 狗精子冷凍稀釋
應用於犬人工授精, 犬種育種保種工作,犬冷凍精液生產製作;
稀釋液的準備:
1.先把犬凍精生產用的A和B液回暖到室溫;
2.按體積的20%,加新鮮蛋黃到A液體和B液中(比如4毫升蛋黃到20毫升瓶的A液;2毫升蛋黃到10毫升瓶的B液);
3.手搖把內含液混勻;
4.把A液保存在室溫,用於步驟1;
5.把B液瓶冷卻到+4°C,用於步驟2;
6.只用富含精子的精液部分來生產凍精。
沖洗:
1.如果收集的精液混有前列腺液,先按1份原精加3-5份A液稀釋,然後在700g重力下離心10-15分鐘;
2.丟棄上清液;
3.小心緩慢地用A恢復到富含精子的體積(根據以往經驗,2-3毫升),混勻(重組精液)。
冷凍操作:
步驟1:*對每份原精(或重組精液),對等緩慢加1份A液,降溫到+4°C。
*通常保存在+4°C至少兩個小時。
步驟2:*對+4°C保存后的混合精液,用1到3分鐘慢慢加B液(也在+4°C),加入B液的量同原始富含精子的體枳相等。
*在+4°C下填充預冷卻的細管並封口。
*繼續在+4°C保存60分鐘。
*把細管放在液氮面上方5釐米處至少20分鐘后再整個沉浸到液氮中。
解凍:
1.細管在+38°C解凍1分鐘;
2.把解凍的精液合併到一試管中,添加等量事先預溫到+38°C精液。
3.立即做子宮內或開腔犬人工授精。
蛋黃的準備和添加:
1.把新鮮雞蛋用70%酒精洗淨,晾乾;
2.打開雞蛋,保持卵黃膜不破;
3.分離卵黃與蛋清;
4.把蛋黃在乾淨無絨的紙巾上滾動,黏走 的蛋白;
5.用乾淨的針筒把蛋黃吸到無菌的燒杯里,丟棄蛋黃膜;
6.用校準過的針筒或移液槍加定量的蛋黃到稀釋液。
包括:水,檸檬酸納,TRIS,葡萄糖,甘油,檸懞酸,MOFA專有護精因子和慶大黴素;
保存:冷藏于+2°C到+8°C。用無菌方法從小瓶拿出稀釋液。過期作廢。
注意:防止儿童接觸。不可人和動物食用,藥用和臨床用,不能注射用。